การตรวจไวรัสลัมปี สกิน ในตัวอย่างชิ้นเนื้อที่ถูกตรึงด้วยฟอร์มาลินและฝังในพาราฟินด้วยเทคนิค

บทคัดย่อ

บทคัดย่อ

ที่มาของการศึกษา: Lumpy skin disease (LSD) เป็นโรคที่เกิดจาก Lumpy skin disease virus (LSDV) ไวรัสชนิดนี้ก่อให้เกิด ไข้ พบตุ่มที่ผิวหนัง เยื่อเมือก และอวัยวะภายใน สร้างความสูญเสียแก่ปศุสัตว์ของประเทศ การตรวจวินิจฉัยโรค LSD สามารถทำได้โดยวิธี PCR, ELISA และ จุลพยาธิวิทยา อย่างไรก็ตามพบว่าหลายๆกรณีมีความจำเป็นต้องใช้เทคนิคทาง IHC และ IFAT เนื่องจากข้อจำกัดของตัวอย่างที่ถูกแช่ในฟอร์มาลีน แต่การชันสูตรโรคด้วยเทคนิค IHC และ IFAT มีความจำเป็นต้องใช้ primary antibody ดังนั้นจุดประสงค์ของการศึกษาในครั้งนี้คืการแสดงออกของ recombinant protein เพื่อนำมาผลิต primary antibody ที่จำเพาะต่อ LSDV สำหรับการชันสูตรโรคเพื่อขยายความสามารถและเพิ่มทางเลือกของการชันสูตรโรค

วิธีการ: เพิ่มจำนวนสารพันธุกรรมของ p32 โดย PCR เพื่อ clone เข้าสู่ cloning vector และ subclone เข้าสู่ expression cloning จากนั้นตรวจสอบ molecular weight ของ recombinant protein P32 ด้วย SDS-PAGE และ western blot เพื่อยืนยัน p32 gene ได้ผ่านการ sequencing และ alignment เพื่อทดสอบ identity จากนั้น นำ antiserum ที่ผ่านการการฉีดหนู นำมาทดสอบกับตัวอย่างที่ให้ผลบวกและลบด้วยวิธี IHC และ IFAT

ผล: จากการทดลองพบว่า สามารถเพิ่มจำนวนสารพันธุกรรมของ LSDV ส่วน p32 gene ได้ นอกจากนี้ยังสามารถแสดงออกของโปรตีนลูกผสมของ P32 ใน E coli ได้ ซึ่งสามารถนำ antiserum มาใช้ใน การตรวจด้วยวิธี IHC และ IFAT ได้ นอกจากนี้ลำดับนิวคลิโอไทด์ของ p32 มีความใกล้เคียงกับลำดับนิวคลีโอไทด์ของเชื้อไวรัสที่พบในประเทศจีน

สรุป: สามารถเพิ่มทางเลือกการชันสูตรของโรค LSD ได้จากการใช้เทคนิค IHC และ IFAT ทำให้สามารถตรวจตัวอย่างที่ถูกแช่ในฟอร์มาลีนได้ ซึ่งเป็นการเพิ่มศักยภาพและขยายความสามารถของห้องปฏิบัติการเพื่อการให้บริการและลดข้อจำกัดของการขาดแคลนหรือจำเป็นต้องสั่งชื้อแอนติบอดี้จากต่างประเทศได้